小鼠Endostatin基因的分子克隆、鉴定及双基因共表达质粒pEgr-IFNγ-Endostatin的构建

Molecular Cloning and Identifying of Mouse Endostatin Gene and Construction of Dual-gene Co-expression Plasmid pEgr-IFN_Y-Endostatin

目的克隆小鼠内皮抑素(Endostatin)编码区 cDNA 序列及测序鉴定并构建 pEgr-IFNY-Endostatin 双基因表达载体。方法从小鼠肝细胞提取总 RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增获得全长 Endostatin 基因,测序并利用基因重组技术构建 pEgr-IFNY-Endostatin 双基因共表达质粒。结果分光光度计测定50倍稀释的总 RNA 抽提产物,A_(260)=0.834,A_(280)=0.407,A_(260):A_(280)=2.049,总 RNA 浓度为1.668g/L。EndostatincDNA 的RT-PCR 产物与载体 pMD18T 连接并经测序证实 Endostatin 序列与文献报道完全一致,并构建了含 Egr-1启动子的 IFNY 和 Endostain 双基因共表达质粒 pEgY-IFNY-Endostatin。结论成功克隆小鼠 Endostatin 基因,构建了pEgr-IFNY-Endostatin 双基因共表达质粒。