摘要
目的通过体外转录获得SARS冠状病毒RNA片段,为建立RTPCR和荧光定量PCR诊断方法提供阳性对照。方法根据GenBank登录SARS冠状病毒Tor2株基因组序列,选择基因组中18138-18327nt作为目的扩增序列,并将其分解为首尾重叠的3个片段,人工合成对应的单链DNA序列,通过退火延伸获得全长dsDNA片段,PCR扩增该片段后,连接至载体pMD18T上,筛选含目的插入片段的阳性重组质粒pMD18TSARS,用BamHⅠ和HindⅢ切出目的片段,连接至线性化表达性质粒pGEM上;筛选阳性重组质粒pGEMSARS,测序鉴定后,经HindⅢ酶切线性化,用T7RNA聚合酶进行体外转录,得到含SARS冠状病毒目的序列的RNA片段,转录产物经电泳观察后,用RTPCR验证。结果获得含SARS冠状病毒目的基因序列的RNA片段。结论该RNA片段可用于SARS冠状病毒RTPCR和荧光定量RTPCR诊断方法的阳性对照。
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第24期2472-2474,共3页
Journal of Third Military Medical University
基金
重庆市攻关课题(2003年紧急启动项目)~~