抗人白介素-28A单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗人白介素-28A(hIL-28A)单克隆抗体(mAb)。方法以hIL-28A融合蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备抗hIL-28A mAb。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定mAb的Ig亚类,通过ELISA、Western blot、免疫组化染色法、流式细胞分析、激光共聚焦显微镜技术鉴定mAb的特异性。结果获得2株稳定分泌抗hIL-28A mAb的杂交瘤细胞,但2株mAb均与hIL-29有弱交叉反应。2株mAb的类别均为IgM。Western blot分析表明,此mAb所识别的靶分子的相对分子质量(Mr)约为19 000。免疫组化染色表明,mAb与包皮和肺组织中的上皮细胞、结肠组织中的疑似巨噬细胞呈阳性反应。流式细胞仪分析显示,2株mAb与人脐静脉内皮细胞系HUVEC细胞的反应均呈阳性。激光共聚焦扫描显微镜观察到荧光标记的阳性反应物主要位于HUVEC细胞胞浆内。结论成功地制备抗hIL-28A mAb,为病毒感染性疾病、肿瘤和其他疾病的研究提供新的手段。