Construction of eukaryotic expression plasmid containing HCV NS3 segment and protein expression in human HL-7702 hepatocytes

瞄准：构造标志包含 HCV NS3 分割的真核细胞的表示原生质并且在正常人的 hepatocyte HL-7702 分析 NS3 蛋白质的表示。方法：我们从包含 HCV 染色体的整个长度的原生质标志 pBRTM/HCV 1-3011 放大了 HCV NS3 碎片，重新结合它与到形式的表示向量 pcDNA3.1 (-) 真核细胞的表示向量 pcDNA3.1 (-)/NS3，和有由猫的重新结合的原生质标志的 transfected 人 HL-7702 hepatocytes 离子的聚合物。表示 HCV NS3 蛋白质被免疫检测并且分析组织化学的方法和西方的污点。结果：放大 NS3 碎片有正确分子重量和顺序。成功地构造的真核细胞的表示原生质标志是到 HL-7702 房间的 transfected。有的表示 NS3 蛋白质改正分子量 70000。结论：包含 HCV 的 NS3 片断的真核细胞的表示向量 pcDNA3.1 (-)/NS3 能被构造， NS3 碎片的顺序与模板一致。正常人的 HL-7702 hepatocytes 能高效地表示特定的 HCV NS3 蛋白质在试管内。

AIM： To construct the eukaryotic expression plasmid containing HCV NS3 segment and to analyze the expression of NS3 protein in normal human hepatocyte HL-7702. METHODS： We amplified HCV NS3 fragment from plasmid pBRTM/HCV 1-3011 containing the whole length of HCV genome, recombined it with expression vector pcDNA3.1（-） to form the eukaryotic expression vector pcDNA3.1（-）/NS3, and transfected human HL-7702 hepatocytes with the recombined plasmid by cationic polymers. The expressed HCV NS3 protein was detected and analyzed by immunohistochemical method and Western blot. RESULTS： The amplified NS3 fragments had correct molecule weight and sequence. The successfully constructed eukaryotic expression plasmids were transfected to HL-7702 cells. The expressed NS3 proteins had correct molecular weight 70000. CONCLUSION： Eukaryotic expression vector pcDNA3.1 （-）/NS3 containing NS3 segment of HCV can be constructed, the sequence of NS3 fragments is consistent with the template. Normal human HL-7702 hepatocytes can efficiently express specific HCV NS3 protein in vitro.