聚合酶链反应检测脑膜炎奈瑟菌DNA片段

我们采用聚合酶链反应(PCR)方法对该菌染色体中一段核苷酸作为靶 DNA 进行扩增,并对部分确诊病例的临床标本进行了检测,效果满意,现报道如下。一、材料与方法1.脑膜炎奈瑟菌的体外培养与 DNA 提取:用脑膜炎奈瑟菌的标准菌株,分别接种于培养基上3～5天,用生理盐水洗下放入终浓度10mmol/L 的 EDTA液中,按每克湿菌体加入0.25g SDS,60℃水浴10分钟并不断摇动,用常规酚、氯仿-异戊醇提取 DNA。2.对照组细菌 DNA 的提取:将卡他布兰汉菌、干燥奈瑟菌、浅黄奈瑟菌和金黄色葡萄球菌在培养基上37℃孵育48～72小时,用生理盐水洗下加入 EDTA,使其终浓度为10mmol/L。取 Eppendrof 管将其对照组细菌各分为2管,其中1管加入不同浓度的脑膜炎奈瑟菌,同前法提取 DNA;淋病奈瑟菌。