快速鉴定啤酒污染菌的RAPD反应条件优化

随机扩增多态性DNA（RAPD-PCR）技术是一种快速、简单的鉴定技术，在啤酒污染菌的快速鉴定和研究腐败菌的多样性方面具有重要的应用价值。本次研究表明采用CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）法能够有效地提取成分复杂的MRS培养基中的细菌DNA。对基于引物M-13的RAPD．PCR的反应体系进行优化，确定最佳的反应体系为：Mg^＋的浓度为3．5～4．0mmol／L，引物浓度为2．0μmlol／L，模板浓度为4．8～0．48ng／μL，每种核苷酸的浓度为200／maol／L，Taq DNA聚合酶添加量为2．5U／25μL，退火温度为42℃。对32株分离的啤酒污染菌株进行RAPD—PCR扩增鉴定，结果表明RAPD的指纹清晰，重复性好，适用于构建标准菌的指纹数据库。