利用胚胎干细胞建立贴壁制备类胚体的新方法

为改进类胚体制备过程中分化不同步等问题，探讨采用小鼠胚胎干细胞建立贴璧制备类胚体的新方法。当小鼠胚胎干细胞R1生长至70％-80％亚融合时，将其消化成单细胞，以1×10^6的细胞数接种到100mm组织培养皿中，用含低浓度白血病抑制因子（1ng／ml）的胚胎干细胞培养液连续贴壁培养3天后，收集贴壁细胞团继续悬浮培养。对悬浮培养的类胚体及其冷冻切片行形态学观察。结果发现该类胚体大小均一，分化同步。能展示从简单类胚体到成熟囊性类胚体的典型发育过程。免疫荧光染色观察到悬浮及贴壁分化的类胚体甲胎蛋白（AFP）、血小板内皮细胞粘附分子-1（PECAM—1）及神经丝蛋白68kD（NF-68）三种标志物表达均为阳性。结论：与目前常用的类胚体制备方法相比，本法操作简便，类胚体形成率高、分化阶段同步、结构典型，具有分化为三个胚层来源细胞的能力。