人血管内皮细胞生长因子重组腺病毒载体的构建、鉴定及在骨髓间充质干细胞的表达

为构建人血管内皮细胞生长因子（VEGF）165腺病毒表达载体，体外转染大鼠骨髓问充质干细胞，并研究其相关特性，采用细菌内同源重组技术快速构建Ad—VEGF165腺病毒重组质粒，经酶切及测序鉴定正确后转染人胚肾细胞HEK293包装成为重组Ad—VEGF165腺病毒，并进行电镜观察及滴度测定。感染大鼠骨髓间充质干细胞观察VEGF165基因的转录和表达。研究发现，酶切鉴定及基因测序证实重组腺病毒质粒含有hVEGF165 cDNA，电镜显示包装细胞中有大量病毒颗粒存在，测定包装的病毒滴度为6．3×10^10 TCID 50／ml。逆转录一聚合酶链反应（RT～PCR）、免疫组织化学及免疫印迹检测骨髓间充质干细胞内有VEGF。的转录和表达。提示：构建的VEGF腺病毒表达载体可有效感染骨髓间充质干细胞，并在体外高效表达。