GFP基因转染示踪成肌细胞植入体内的转归

目的实现绿色荧光蛋白(GFP)报告基因在成肌细胞中高效稳定持久的表达,观察成肌细胞作为基因的载体细胞植入SD大鼠体内后的转归。方法构建携带GFP的逆转录病毒载体(pLgXSN),经PT67包装,G418筛选得到稳定的产毒克隆,用含GFP的病毒上清感染成肌细胞。被感染的成肌细胞植入同种动物的后肢的肌肉内,观察其在同种动物体内的转归。于术后4周取动物后肢肌肉,在共聚焦显微镜下观察GFP的表达,HE染色观察组织的结构。结果经双酶切鉴定及测序鉴定证实重组逆转录病毒载体构建成功。转染成肌细胞后48h,在共聚焦显微镜的激光激发下可观察到明亮的绿色荧光,转染效率33%,G418筛选后转染效率达90%。术后4周,在HE染色及共聚焦显微镜下观察可见SD大鼠骨骼肌中转基因的GFP荧光阳性的成肌细胞已与宿主的成肌细胞融合。结论构建的重组逆转录病毒载体,能在成肌细胞中稳定持久的表达,成肌细胞可作为生物细胞工程治疗的载体细胞。