转基因猪外源生长激素基因的定位研究——非同位素标记染色体原位杂交技术

Studies on Exogenous Growth Hormone Gene Localization of Transgenic Pigs——The Techniques of Nonisotopic in Situ Hybridization on Chromosomes

近几年来发展起来的染色体原位杂交技术是进行基因定位研究的重要手段。它为进一步进行基因定点整合研究提供依据。本文采用非同位素标记染色体原位杂交技术对经显微注射得到的转基因猪进行了内源和外源猪生长激素(PGH)基因在染色体上定位的研究。 用BhlI对pSMTPGH注射基因(本室制备)进行单酶切,选取3.5kb片段以Dig进行标记。为了提高灵敏度,我们采用了胶体金标记抗体技术并结合使用银增加试剂。利用染色体的组型分析,对杂交点的分布进行了统计学分析,发现内源PGH基因位于12p^(11),与国外Thomsen,P.D.等报道的一致。插入的外源PGH基因呈随机分布,但对某一转基因猪来说,外源基因的插入是集中在某一染色体上。这一结果的发现为进行转基因猪外源基因定点整合提供了依据,也为研究外源基因整合位点和转基因猪表观性状的关系准备了条件。

It was the first time to localize the exogenous PGH gene on chromosomes of transgenic pigs using nonisotopic in situ hybridization. The endogenous PGH gene was localized at 12pn , and the exogenous PGH genes were localized at 9q15, 2p12and 10pn respectively for different transgenic pigs. This study has demonstrated that foreign genes can be integrated in chromosomes randomly.