类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的表型及其侵蚀软骨的特性

目的：分离培养类风湿关节炎（RA）滑膜细胞、检测其表面标志及研究其对软骨的侵蚀特性。方法：取6例RA患者滑膜，分别采用组织块、胰蛋白酶消化及胶原酶、胰蛋白酶先后消化培养后，用相差显微镜观察细胞的形态、用流式细胞术（FCM）检测培养细胞表面标记CD3、CD19、CD14、CD68、CD44、CD55、CD90及细胞内脯氨酰-4-羟基化酶（Prolyl-4-hydroxylase）的表达并与传统的免疫组化染色法检测波形蛋白的表达相比较。并用SCID小鼠研究成纤维样滑膜细胞（FLS）对软骨的侵蚀作用。结果：（1）3种方法均分离出FLS，胶原酶与胰蛋白酶先后消化法分离细胞所需时间少、获得的细胞数多、纯度较高。（2）第2代细胞与第3代细胞的均质性分别达90％及98％以上。（3）在第3～6代的细胞比较稳定，增殖活跃；第7代以后增长缓慢，逐渐老化。（4）流式细胞术分析显示，原代细胞随着传代次数的增加逐渐纯化，第3～6代CD90^＋细胞〉98％，脯氨酰4-羟基化酶＋细胞〉98％；与免疫组化检测波形蛋白的表达相一致。（5）将第4～5代的细胞和软骨一起植入SCID小鼠，或单独注入SCID小鼠的膝关节，都可导致软骨的浸蚀性破坏。结论：以胶原酶与胰蛋白酶先后消化分离FLS，效果较好，CD90、脯氨酰4-羟基化酶可作为鉴定FLS的标志。用SCID小鼠可研究FLS对软骨的侵蚀特性。