伪狂犬病病毒Fa株胸苷激酶基因缺失株的构建

CONSTRUCTION OF THYMIDINE KINASE DELETION MUTANTS OF PSEUDORABIES VIRUS FA STRAIN

采用外切除缺失法对已克隆于ｐＢＲ３２２中包含伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）胸苷激酶（ＴＫ）基因的ＢａｍＨＩ－１１片段（ｐＰＢ１１）进行改建，经筛选获得４株ＴＫ基因缺失重组质粒（ｐＤＴＫ３－１、ｐＤＴＫ３－６、ｐＤＴＫ３－８和ｐＤＴＫ５－６），对其进行酶切鉴定和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转印杂交，结果其１１片段迁移率均发生改变，缺失的碱基数分别约１２５０、１１００、１２５０和２００ｂｐ。用ＰＲＶＦａ－ＤＮＡ或ＰＲＶＦａ细胞毒与重组质粒ｐＤＴＫ３－６ＤＮＡ和ｐＤＴＫ５－６ＤＮＡ通过磷酸钙法和脂质体法转染ＴＫ－１４３细胞，增殖后经５＇－溴脱氧尿嘧啶（５＇－ＢＵＤＲ）筛选得到ＰＲＶＦａＴＫ缺失株ＰＦＤＴＫＰ３－６、ＰＦＤＴＫＰ５－６、ＰＦＤＴＫＬ３－６和ＰＦＤＴＫＬ５－６。以斑点杂交技术和胸腺嘧啶核苷蚀斑放射自显影法检测证明这些缺失株均无ＴＫ活性。免疫小鼠以ＥＬＩＳＡ检测其免疫血清，抗体滴度可高达１：６４。对ＰＲＶＦａ强毒攻击有一定保护率。