Tet-On调节的自杀基因对人乳腺癌细胞的体外杀伤和旁观者效应研究

目的探讨T et调控下的自杀基因H SV tk对人乳腺癌细胞的杀伤作用和旁观者效应。方法构建重组逆转录病毒载体pR evTRE/H SV tk,通过磷酸钙共沉淀法,分别将pR evTRE/H SV tk和pR evT et-O n导入乳腺癌细胞株M CF-7。以RT-PCR法检测不同D ox浓度下转染乳腺癌细胞中H SV tk基因的表达,M TT法检测细胞生长抑制率,通过检测混合细胞生长克隆来评价T et调控下的自杀基因的旁观者效应和对乳腺癌细胞的杀伤作用。结果建立了一株稳定的受多西环素(D oxcycline,D ox)诱导、表达H SV tk基因的乳腺癌细胞株M CF/TRE/tk/T et-O n。当G anc iclov ir(GCV)及D ox浓度增加时,细胞存活率下降。M CF/TRE/tk/T et-O n在总细胞中的比例>10%时,有明显的旁观者效应。结论在T et-O n调控下,导入乳腺癌细胞中的H SV tk基因产物能将药物前体GCV转变为毒性代谢物质,并诱发旁观者效应进一步杀灭乳腺癌细胞。