农杆菌介导法获得转pac1基因小麦并表现对大麦黄矮病毒的抗性

自裂殖酵母中克隆得到pac1基因，与GenBank中相关的核苷酸序列有99.3％的相似性．编码蛋白质序列分析表明，其具有RNaseⅢ结构域和双链RNA结合结构域．体外活性测定表明，以pET．5a系统在大肠杆菌中表达的pac1产物能够降解dsRNA．将pac1导入双元载体pBll21，以培养7～10d的小麦幼胚为受体材料，利用农杆菌株LBA4404对小麦品种陇鉴127进行转化，获得了41株G418抗性植株，经点杂交（dot blot）、RT-PCR和nptⅡ ELISA检测证实，其中25株整合有外源基因并能正常表达．对这25株转基因小麦进行大麦黄矮病毒的抗性鉴定表明，有12株表现低度抗性，表现为低接毒量时无症状，接毒量提高时发病且严重；有12株表现中度抗性，表现为低接毒量时无症状，接毒量提高时局部有不严重症状；有1株表现高度抗性，两种情况下均无症状．抗性实验结果表明了pac1介导的抗性具有剂量效应的特点。