肠膜样明串珠菌B-1149中蔗糖磷酸化酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

分离和鉴定了肠膜样明串珠菌NRRL B-1149的蔗糖磷酸化酶（SPase）基因1149sp。它由1479bp的核苷酸构成，编码了1149 SPase的492个氨基酸残基，分子量为56．1k。该基因具有独特的C端氨基酸序列（^439DVETPSDTHKITRKDKSGENVAVLVANA ADKTFTITANGEEILANTEADKQQL^492）。在大肠杆菌中表达1149sp，纯化的1149 SPase对蔗糖的比活力为1．49IU／mg。SPase在宽泛的反应温度和pH范围内均有活性，分别为20～50℃，pH6．0～7．5。最适温度和pH分别为37℃和6．7。1149 SPase对底物蔗糖的米氏常数Km为6．3mmol／L，催化速度常数放。是1．59s^-1。其具有宽泛的受体特异性，能将蔗糖的部分葡萄糖基或葡萄糖-1-磷酸转移至多种受体。