逆转录病毒载体介导人GM-CSF基因在膀胱癌细胞株的转移和表达

RETROVIRUS MEDIATED GENE TRANSFER AND EXPRESSION OF HUMAN GM-CSF IN BLADDER CARCINOMA CELLS

本文报道制备转基因膀胱癌瘤细胞疫苗的可行性。将ＣＭＶ启动子片段和人粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）ｃＤＮＡ，克隆进逆转录病毒载体Ｎ２Ａ，构建逆转录病毒表达载体Ｎ２Ａ／ＣＭＶ／ＧＭ—ＣＳＦ，经Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ包装并转染包装细胞，获得重组逆转录病毒。选择较高滴度的重组病毒（滴度为１×１０￣５～２×１０￣６ＣＦＵ／ｍｌ）感染人膀胱癌细胞株ＢＩＵ—８７，经Ｇ４１８筛选出转基因瘤细胞株ＢＩＵ￣Ｒ。ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测证实ＧＭ—ＣＳＦ基因已整合到其ＤＮＡ上，ＲＴ—ＰＣＲ可检测到转基因细胞中ＧＭ—ＣＳＦ基因的表达。细胞培养上清经ＴＦ—１细胞检测，其ＧＭ—ＣＳＦ分泌量为０．７～７０．７ｎｇ／１０￣６细胞／２４小时。荧光免疫测定发现转基因瘤细胞表面有ＨＬＡ—Ⅰ、Ⅱ类抗原表达。转基因瘤细胞株经６０００ｒａｄＸ射线照射灭活，细胞逐渐死亡，但能持续分泌ＧＭ—ＣＳＦ达两周以上。初步动物试验结果表明，转ＧＭ—ＣＳＦ基因的瘤细胞疫苗具有明显的抑制肿瘤生长的能力。