人巨细胞病毒PP150的原核表达及其ELISA诊断方法的建立

采用基因工程方法组建含有人巨细胞病毒(HCMV)PP 150蛋白强抗原决定簇基因的重组抗原克隆,进行诱导表达及纯化,在此基础上,以纯化重组PP 150蛋白作为包被抗原,对各种条件进行优化,确定判定标准,建立检测HCMV IgM抗体的间接EL ISA方法。用此方法检测266份血清样品,并与EL ISA试剂盒检测结果相比较。结果重组表达质粒pMAL-P 2-PP 150可在E.coliDH 5a中有效表达,表达产物经SDS-PAGE电泳后,凝胶成像系统分析显示相对分子质量约为64 000,约占菌体蛋白的10%。W estern b lot检测,阳性识别率为80%(12/15)。用此蛋白包被EL ISA板,检测正常孕妇血清,与EL ISA试剂盒的诊断符合率为98.1%,敏感性达88.2%,特异性100%。应用本方法检测569份正常人血清样品HCMV-IgM,阳性率为4.1%。提示该重组蛋白具有良好的抗原性,可望替代HCMV感染检测中的全病毒EL ISA试剂盒。