黄花蒿ISSR-PCR反应体系的优化

Optimization for the Reaction System of Southernwood ISSR-PCR

目的：建立黄花蒿（Artemisia annua L．）的ISSR最佳反应体系及PCR扩增参数，为今后利用ISSR标记技术开展黄花蒿种间遗传多样性分析提供一个标准化程序。方法：以黄花蒿DNA为材料，分析了ISSR反应体系中的DNA、Mg^2＋、dNTPs浓度，TaqDNA聚合酶用量以及退火温度对ISSR-PCR扩增的影响。结果：建立了重复性好，分辨率高的ISSR反应体系，即在25止反应体系中，模板DNA浓度为15—45ng,2．5μL的10倍Buffer（Mg^2＋ free）缓冲液，MgCl2 2．0mmol／L，dNTPs为0．15mmol／L，Taq酶1．0U，引物1．0μmol／L；扩增程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s，引物在筛选后的最佳退火温度退火45s，72℃延伸2min，共计40个循环，循环结束后在72℃延伸5min。结论：建立了适用于黄花蒿的ISSR反应体系，为今后利用ISSR标记技术开展黄花蒿种间遗传变异分析和构建遗传图谱奠定了基础。

Objective： In this paper, we analyzed the influence of DNA, Mg^2＋ , dNTPs and Taq DNA polymerase concentration, and annealing temperature of ISSR-PCR amplification, using the materials of southemwood DNA. The stable and reproducible optimal reaction system of amplification parameter was established. This result provided a standardizing process for the analysis of interspecies genetic diversity of southemwood.