利用正交设计优化白桦的SSR-PCR反应体系

Optimization of SSR-PCR System for Betula platyphylla Using Orthogonal Design

利用正交设计L16(45)对白桦SSR-PCR反应体系的5因素(Taq酶,Mg2+,模板DNA,dNTP,引物)在4个水平上进行优化试验,筛选出各反应因素的最佳水平,建立了白桦SSR-PCR反应的最佳体系(20μL):DNA100ng,Mg2+浓度为3mmol·L-1,Taq酶0.5U,dNTP浓度为0.5mmol·L-1,引物浓度为0.4μmol·L-1。对白桦SSR-PCR最佳反应体系进行了梯度退火温度,得到的最佳退火温度为59.9℃。

Orthogonal design was used to optimize SSR-PCR amplification system for Betula platyphylla in terms of five factors （Taq DNA poIymerase, Mg^2＋ , DNA template, dNTP and primer） from four levels. An optimal SSR-PCR system for Betula platyphylla was obtained as 100 ng DNA template, 3 mmol· L^-1 Mg^2＋ , 0.5 U Taq DNA polymerase, 0.5 mmol· L^- 1 dNTP, 0.4 μmol · L^-1 primer for 20 μL reaction system. The optimal annealing temperature for SSR-PCR reaction system is determined as 59.9 ℃ by gradient PCR.