标记引物逆转录原位聚合酶链反应的建立及对丙型肝炎病毒的检测

建立光敏生物素补骨脂素（ＢＰ）标记引物逆转录原位聚合酶链反应技术（标记法），并以此研究石蜡包埋肝组织中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的定位分布。方法用葡聚糖凝胶纯化ＨＣＶ靶基因被标记引物，在其负链５′非编码区将ＢＰ标记置链４处，所得终产物１４５ｂｐ。分别用标记法、间接逆转录原位聚合酶链反应（间接法）和原位杂交检测ＨＣＶ。结果表明用ＢＰ标记引物进行聚合酶链反应是可行的，并具有良好的特异性。应用间接法及标记法检测ＨＣＶ，其检出率分别为５９％（１０／１７）和５３％（９／１７），差异无显著意义（χ２＝０．１２，Ｐ＞０．０５）；原位杂交对ＨＣＶ的检出率仅为２４％（４／１７），明显低于上述两种方法，差异有显著意义（χ２＝３．９７和４．３７，Ｐ＜０．０５）。ＨＣＶ的分布以肝细胞浆型为主，单核细胞及胆小管上皮细胞也可见阳性信号。结论间接法和标记法对检测石蜡包埋肝组织中的ＨＣＶ均具有良好的敏感性和特异性；在肝组织中，ＨＣＶ不仅存在于肝细胞，而且也存在于单核细胞及胆小管上皮细胞中，提示肝细胞可能不是ＨＣＶ唯一的复制部位。