重组人肿瘤坏死因子突变体的构建和表达

CONSTRUCTION AND EXPRESSION OF RECOMBINANT HUMAN TUMOR NECROSIS FACTOR MUTANT

运用ＰＣＲ技术，对天然人肿瘤坏死因子α（ｈｕｍａｎｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ一α，ＴＮＦ）基因进行了改造，去除了天然ＴＮＦＮ端的７个氨基酸，同时以Ａｒｙ￣８Ｌｙｓ￣９Ａｒｇ１０Ｐｈｅ１５７分别取代了原来的ＰｒｏＳｅｒＡｓｐＬｅｕ，形成新的突变体ＴＮＦ△。将突变体克隆于表达载体ｐＢＶ２２０后，在Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α中得到了表达，表达产物的分子量为１７ＫＤ。表达量为菌体总蛋白量的１５％。Ｌ９２９细胞的杀伤活性为２．２×１０６Ｕ／ｍｌ，是天然ＴＮＦ活性的七倍。本工作对研制高效低毒副作用的ＴＮＦ制剂具有重要意义。