靶向PPARγ基因siRNA载体的构建及沉默效应

目的构建靶向过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPARγ)基因的小干涉RNA(small interfering RNA,siRNA)载体,转染骨髓基质细胞(marrow stromal cells,MSCs)后观察其对PPARγmRNA的抑制作用。方法根据siRNA设计原则,在PPARγmRNA序列中选择2个特异性靶序列(677-695和497-515)及同时设计1条无关对照序列；体外合成对应发卡样DNA片段,经退火后,将其定向克隆入siRNA载体pR- NAT-U6．2,将重组siRNA载体pRNAT-U6．2-PPARγ用脂质体包裹转染入MSCs后,采用RT-PCR检测PPARγ基因mR- NA表达水平的变化。结果得到阳性重组克隆pRNAT-U6．2-SPPARγ,经过PCR鉴定与测序,结果正确；RT-PCR检测转染MSCs显示,PPARγ基因的表达水平明显降低。结论成功构建靶向PPARγ基因的siRNA载体pRNAT- U6．2-SPPARγ,转染MSCs可以有效抑制PPARγmRNA的表达,这为预防酒精性股骨头坏死发生的研究奠定了可靠基础。