正交法用于真菌微卫星PCR体系优化

Optimization of SSR-PCR reaction system in fungus by orthogonal design

目的:探讨影响真菌微卫星聚合酶链反应(SSR-PCR)的多个因素,建立PCR的最佳反应体系,为进一步进行真菌的鉴定、遗传多样性研究奠定基础。方法:利用正交设计,从Taq DNA聚合酶、模板DNA、dNTP、引物4种因素,对真菌微卫星反应体系进行优化分析,并确定PCR适宜的退火温度及循环次数。结果:各因素的不同水平对PCR结果都有显著影响,其中模板DNA影响最大。在PCR反应体系中(25μL),Taq DNA聚合酶1U,模板DNA 30 ng,dNTP 150μmol.L-1,引物0.25μmol.L-1为最佳。结论:采用正交法实验设计,对真菌微卫星PCR体系优化更科学,得出的实验体系有效范围宽,且高效、快捷。