外周血DNA提取方法及其特点

为适应临床检验工作的需要,介绍几种外周血提取DNA的常用方法及其各自特点。全血酸性柠檬酸葡萄糖溶液B抗凝后,进行有核细胞分离,离心去上清,得到白细胞沉淀物,用于外周血DNA的提取。经典酚/氯仿提取法,可有效去除蛋白质及色素等物质,使DNA达到较高的纯度,但自行配制饱和酚费时耗力,而在市场上购买的饱和酚大多达不到pH8.0,根据相似相溶原理,酸性酚会使DNA溶于其中,降低提取量,此外沉淀DNA时需要一价阳离子的参与。盐析法提取DNA可不用饱和酚,费用低,且沉淀DNA时不需加一价阳离子,目前多数实验均采用此法。碘化钾法提取DNA步骤少且时间短,DNA获得率较高,所用试剂价格便宜、性质稳定,不需特殊实验条件及蛋白酶K。煮沸裂解法提取DNA,可导致上清液中模板核酸量减少、抑制扩增效率,实验室除做一些感染性的指标外很少采用此方法。就实验本身而言,需根据实际情况合理选择提取方法,以节省时间和经费,顺利完成实验。