谷胱甘肽、抗坏血酸对乳酸脱氢酶抑制作用的比较

目的探讨谷胱甘肽(GSH)和抗坏血酸对乳酸脱氢酶(LDH)促动力学的影响,并对二者进行比较。方法采用分光光度法追踪酶反应,用Lineweaver-Burk作图法分析动力学机制,并用计算法求取抑制常数及抑制率/[I]。结果在pH7.0、25℃、101.3kPa条件下,在L-P方向,固定[Lac],变化[NAD+],随GSH和抗坏血酸浓度增加,表观KmNAD+及表观VmaxNAD+都逐渐减小,而表观KmNAD+/VmaxNAD+不变;而固定[NAD+],变化[Lac],表观KmLac逐渐增大,表观VmaxLac不变,而表观KmLac/VmaxLac增大。反应体系加入GSH所求得的抑制常数大于加入抗坏血酸的抑制常数(KLDH1-NAD+-GSH=0.0418mmol/L;KLDH-NAD+-抗坏血酸=0.0397mmol/L和KLDH5-NAD+-GSH=0.0606mmol/L;KLDH5-NAD+-抗坏血酸=0.033mmol/L。)而抑制率/[I]小于加入抗坏血酸的抑制率/[I](im抗坏血酸LDHI=0.0336;im抗坏血酸LDH5=0.0281;imGSHLDH1=0.0066;imGSHLDH5=0.0059)。结论GSH和抗坏血酸二者都结合于LDH-NAD+二元复合物,形成死端三元复合物而抑制LDH催化的反应;GSH的抑制率/[I]小于抗坏血酸的抑制率/[I]。