巴西橡胶树橡胶延长因子cDNA的克隆及序列测定

在巴西橡胶树中，乳管里的橡胶粒子是橡胶（顺式１，４—聚异戊二烯）生物合成的场所。橡胶延长因子（ＲＥＦ）这种１４千道尔顿的蛋白质与橡胶分子按１：１在橡胶粒子上结合。为了获得更多有关ＲＥＦ的功能及其在橡胶粒子中的合成、装配等方面的信息，我们分离了编码ＲＥＦ的ｃＤＮＡ克隆。我们利用ＲＥＦ的抗体对橡胶叶片λｇｔ１１ｃＤＮＡ表达文库进行筛选并获得几个阳性克隆。对ＲＥＦｃＤＮＡ克隆的序列分析表明，ＲＥＦｍＲＮＡ含有一个具１２１个核苷酸的５′端非转译序列及一个具２０５个核苷酸的３′端非转译区段。开放阅读框编码完整的１４千道尔顿ＲＥＦ蛋白质，不带任何额外的氨基酸。ＲＥＦｃＤＮＡ在ｐＧＥＭ—３Ｚ／－４Ｚ中作亚克隆并进行体外表达，其翻译产物是一种１４千道尔顿的蛋白质，该蛋白质可与ＲＥＦ的相应抗体发生免疫沉淀反应。于体外翻译产物中加入微粒体膜不改变该ＲＥＦ蛋白质的迁移率。以上结果和序列数据说明，ＲＥＦ不是以前蛋白质的形式合成的。我们的结果表明，ＲＥＦ是在乳管细胞质中的游离多核糖体上合成的，而橡胶粒子的装配则很可能发生在胞液中。