云南个旧肺腺癌细胞株GLC-82 cDNA文库的构建和鉴定

目的采用SMART（switching mechanism at 5＇end of RNA transcript）技术，构建了人肺腺癌细胞株GLC-82cDNA文库，以期进一步分离人肺癌组织特异表达基因和肺癌特异相关基因．方法从生长良好的人肺腺癌细胞株GLC-82中提取总RNA，利用经修饰的oligo（dT）引物（含SfiⅠB酶切位点）合成cDNA第一链，利用点突变的鼠莫洛尼氏白血病毒逆转录酶在序列合成的末端会自动加上3个胞嘧啶核苷酸的特性，SMART核苷酸（含SfiⅠA酶切位点）的3＇为正好与之互补的3个鸟嘌呤核苷酸，可以作为cDNA第一链在mRNA5＇端延伸出去的模板，