内毒素致兔线粒体DNA基因突变的SSCP检测

SSCP detection of ET-induced mtDNA mutation in rabbits

将20只健康实验用白兔随机分为4组(5只/组):正常对照组(A组)、阳离子A处理组(B组)、内毒素处理组(C组)、阳离子A+内毒素处理组(D组),运用改进的碱变性法提取肝细胞的线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA),设计4对引物扩增mtDNA的tRNALeu(UUR)、tRNALys、ATPase8、ATPase6基因,同时运用分光光度计法对扩增产物进行质量鉴定,并运用聚合酶链式反应-单链构象多态性分析技术对PCR产物进行突变分析。结果发现:C组tRNALeu(UUR)基因在凝胶中的带型出现泳动异常,表明该基因发生了碱基突变,序列测定表明该突变为2716位的A→G点突变,同时其他各组的tRNALeu(UUR)基因无突变发生。该结果提示内毒素可以导致mtDNA的tRNALeu(UUR)基因发生突变,而阳离子A对这一突变具有保护效应。

To study the mutational effect of endotoxin （ET）-induced mitochondrial DNA （mtDNA）, 20 white rabbits were divided randomly into 4 groups of 5 rabbits each： normal control group （group A）, CA treated group （group B）, ET treated group （group C）, and CA＋ET treated group （group D）. The liver mtDNA was extracted for detecting the mutations of tRNA^Leu（UUR） gene,and CA has antagonistic and protective effect on this mutation of tRNA^Leu（UUR） gene caused by ET.