针对ATM基因RNA干扰质粒的构建及鉴定

Construction and identification of the RNA interference vector targeting ATM gene

目的:构建针对ATM基因的RNA干扰表达质粒pRiATM,并观察其抑制SPCA1人肺癌细胞ATM表达的效果。方法:构建针对ATM基因的短发夹状小干扰RNA真核表达载体pRiATM,并短暂转染SPCA1细胞,采用荧光定量RT-PCR和Western blotting观察其抑制SPCA1细胞ATM表达的效果。结果:pRiATM1和pRiATM2转染SPCA1细胞后,与转染pRiG-FP非特异性对照组相比,ATMmRNA水平分别下降86.4%和77.6%(两组均P<0.01)。与转染pRiGFP对照组相比,pRi-ATM1组和pRiATM2组ATM蛋白表达水平分别是对照组的4.3%和10.6%(均P<0.01),以pRiATM1抑制ATM表达效果最显著。结论:pRiATM质粒构建成功,转染SPCA1细胞后可以明显抑制ATM基因的表达。