幽门螺杆菌cagA蛋白的制备级复性和纯化

目的：通过优化复性液的组成、 pH值、稀释度等, 建立幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A（cytotoxin associated gene A, cagA）表达产物的制备级复性及纯化方法.方法：以包涵体形式存在的cagA表达产物先用5 mL/L Triton X-100进行初步纯化, 使其纯度达到约90%;再用含8 mol/L脲的变性剂溶解包涵体, 用复性液[0.1 mol/L Tris-HCl、 2 mmol/L 乙二胺四乙酸（EDTA）、 0.1 mmol/L 氧化型谷胱甘肽（GSSG）、 8 mmol/L还原型谷胱甘肽（GSH）及 50 mmol/L 精氨酸（Arg）, pH8.0]稀释复性后, 用DEAE-HP阴离子交换色谱进行纯化.结果：用稀释法复性及液相色谱法纯化, 一次可得到100～140 mg的cagA.ELISA检测其抗原活性为1∶ 16 000;SDS-PAGE检测纯度为98%.结论：用制备级复性、纯化制备的cagA, 可作为抗原用于制备检测抗幽门螺杆菌抗体的检测芯片, 效果良好, 并已获得国家新药批文.