山羊支原体肺炎亚种Hsp70基因克隆与序列分析

山羊传染性胸膜肺炎(contagious caprine pleuropneumonia,CCPP)是由山羊支原体山羊肺炎亚种(M.capricolum subsp.Capripneumoniae,Mccp)引起的高度接触性传染病,热休克蛋白Hsp70,在Mccp所有蛋白翻译后功能和结构的表达起作用。以Mccp中国分离株87001为模板,扩增了Hsp70的全序列,将该序列克隆到pMD18T载体上并测序。将序列与其它已知动物支原体的Hsp70序列进行分析比较。测序结果87001株Hsp70基因全长1773bp,编码591个aa,第631～633位TGA在支原体编码色氨酸而不是作为终止密码子。将该序列与多种致病支原体Hsp70基因进行分析比较,发现87001株Hsp70基因与山羊支原体山羊亚种(Mcc)、丝状支原体丝状亚种SC的DNA同源性为99.3%～99.4%,氨基酸同源性为99.2%～99.3%,而与非同种支原体猪肺炎支原体232株等Mhp菌株的DNA和氨基酸同源性仅为64.5%～74.4%和59.3%～77%。这表明DnaK基因在种内高度保守,种间差异较大。原核表达得到大小为41Kd的目的蛋白,经Westernblot证实,纯化蛋白可与Mhp阳性猪血清反应,具有免疫活性。