两步法快速建立文蛤高重复性RAPD反应体系

针对RAPD技术重复性不理想的问题,以3个文蛤群体为研究材料,确立“两步法”建立高重复性RAPD优化体系。第一步初筛,即以正交分析法对文蛤RAPD反应体系中各关键组分(DNA模板、引物、dNTPs、Mg2+、Taq聚合酶),均设4个水平进行分析,确定两个待选体系;第二步检测,即以本研究中创立的重复性检测方法对待选方案进一步筛选。结果表明:初筛的两个反应条件体系Ⅰ和体系Ⅱ尽管在扩增条带的产量方面无明显差异,但体系Ⅱ各重复性检测指数明显高于体系Ⅰ;体系Ⅱ为更适合文蛤的RAPD高重复性反应体系。“两步法”中采用的多因素联合优化方案和RAPD重复性检测方法对RAPD技术的改善具有一定的指导意义。