胰岛素样生长因子1基因转染肌源性干细胞及表达

目的检测胰岛素样生长因子1(IGF-1)转染肌源性干细胞效果及IGF-1基因表达情况。方法取失神经骨骼肌,分离、接种培养肌源性干细胞。取第3代细胞,用Lipofectamine介导,将重组质粒PAD-CMV-IGF-1转染肌源性干细胞。荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,酶联免疫吸附试验检测培养上清液中IGF-1的浓度变化,Western blot及实时荧光定量RT-PCR检测细胞内IGF-1及其mRNA的表达,流式细胞仪检测细胞周期。结果在转染2周内细胞表达绿色荧光蛋白。转染后上清液中分泌IGF-1浓度上升,72 h达到高峰为(32.2±5.3)ng/ml,后其浓度逐渐下降。Western blot证实有与IGF-1大小相符条带出现。实时荧光定量RT-PCR证实mRNA表达明显增高,第3天达到高峰。流式细胞检测表明转染后肌源性于细胞S期比例增加。结论PAD-CMV-IGF-1质粒可有效转染肌源性干细胞。