血管内皮生长因子对骨髓间充质干细胞分离培养的诱导分化作用

目的结合骨髓间充质干细胞与血管内皮生长因子(VEGF)的优点,探讨VEGF对其体外诱导分化的作用。为缺血性疾病的治疗提供新思路。方法成人新鲜骨髓,Percoll梯度分离法培养,单克隆培养法分离传代扩增骨髓基质细胞(MSCs)。在大肠杆菌DH5α中扩增和提取,纯化、克隆pcDNA3.0-VEGF165质粒。脂质体法转染MSCs。流式细胞术检测诱导前后MSCs免疫表型变化。一抗VEGF和CD31(1∶50),FITC标记的VEGF二抗和cy3标记的CD31二抗与细胞共同孵育,甘油封片,在激光扫描共聚焦显微镜下观察细胞染色情况。结果转染前表达CD44(75.86%)、CD31(5.63%)。转染后CD44表达明显下调(40.18%),CD31则明显上调(56.20%)。FITC标记后VEGF抗体使细胞显现绿色荧光,cy3标记的CD31抗体使细胞显红色荧光。结论转染VEGF后骨髓间充质干细胞向内皮细胞分化且有分泌VEGF的功能,为干细胞植入及血管再生起到指导作用。