摘要
报道了一个通过有限酶切蛋白质产生多肽片段的方法 .蛋白质经单向SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)分离和用考马斯亮蓝短暂染色后 ,切下所需的蛋白质带 ,将其放入另一个SDS PAGE凝胶的样品槽内 ,在电泳过程中该蛋白质被蛋白酶如蛋白酶V8降解 ,所产生的多肽片段随之被分离 .电泳结束后 ,将多肽片段电印迹至聚偏二氟乙烯 ( polyvinylidenedifluoride,PVDF)膜上 .这些多肽片段从PVDF膜上切下后可以直接被用于分析氨基酸序列 .
A procedurewasusedtoobtain peptidefragmentsforsequenceanalysisfrom proteinsseparatedbygelelectrophoresis.After separationbySDS polyacrylamide gelelec trophoresis (SDS PAGE) ,proteinswerebriefly stainedwithCoomassieblue,interestedprotein containingbandswerecutandloadedontothe wellsofanewSDS PAGEgel.Theproteinwas digestedbyproteaseV8duringelectrophoresis, theresultingpeptidefragmentswereelectroblot tedontopolyvinylidenedifluoridemembrane, andthensequencedwithproteinsequencer.The methodcanbeusednotonlytoobtainaminoacid sequencesfromN terminalblocked proteins, butalsoto producemultipleandindependent aminoacidsequenceinformationfromnormal proteins.
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
1997年第1期68-71,共4页
Progress In Biochemistry and Biophysics
基金
日本政府
联合国教科文组织和国际细胞学联合会资助
关键词
蛋白
有限酶切法
氨基酸序列
limited proteolytic cleavage ,N terminal blocked proteins,SDS PAGE ,elec troblotting ,peptide fragment,amino acid sequence
