化学物对毛发毒性的体外评价方法

目的本研究通过建立大鼠毛囊体外游离培养方法,探讨体外毛囊培养方法作为化学物毛发毒性损害评价系统的可行性,建立快速、简便的化学物对毛发毒性评价方法。方法本研究选用SD大鼠背部皮肤毛囊和触须毛囊,在Williams’E无血清培养基中进行体外游离培养,经过研究比较和统计分析,确定不同部位毛囊的选择、不同生长阶段的毛囊选取、观察时间、评价指标和样本量等要素,建立毛发毒性体外评价系统。在此基础上,以来氟米特、阿糖胞苷、米诺地尔、神经生长因子、表皮生长因子、环孢素A为受试物对该评价系统进行测试。结果通过研究比较和分析,评价系统选用出生后8-12d的SD大鼠背部皮肤毛囊为研究材料,以毛囊培养前4天为观察时间,以每日生长长度和4d净增长度为评价指标,以15枚毛囊为每组样本量。结果来氟米特平均4d净增长长度分别为（0.839±0.111）、（0.683±0.102）、（0.412±0.073）mm,与对照组比较,除2.5μg/ml组外差异均有统计学意义（P〈0.05）,25和50μg/ml则完全抑制毛发生长,未见毛发生长现象。阿糖胞苷平均4d净增长长度分别为（0.719±0.127）、（0.588±0.109）和（0.413±0.141）mm,与对照组比较,4d平均净增长长度差异都有统计学意义（P〈0.05）,而且25、50和75μg/ml3组之间,差异也都具有统计学意义（P〈0.05）。对已知可促进毛发生长的受试物米诺地尔（Minoxidil）、环孢素A（cyclosporin A,CsA）、神经生长因子（nerve growth factor,NGF）、表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF）进行观察。结果发现,米诺地尔在浓度为70、140和280μg/ml的对体外培养的毛囊具有促进生长的作用,毛囊4d平均净增长长度与对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）,在560μg/ml时毛囊4d平均净增长长度为（0.458±0.136）mm,对毛囊具有抑制生长的作用。其他受试物环孢素A（120μg/L）、神经生长因子（100μg/L）、表皮生长因子（20μg/L）均有促进毛发生长的作用,4d平均净增长长度与对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论采用SD大鼠背部皮肤毛囊体外培养建立研究化学物对毛发毒性的评价系统是可行的。该系统简单易行,针对性强,周期短,取材方便,指标客观量化,经过进一步完善和验证有望成为一个化学物对毛发生长毒性和药理作用的评价方法。