红细胞分化相关蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

应用杂交瘤技术和电泳迁移超滞留技术筛选和制备红细胞分化相关蛋白单克隆抗体，以阐明此类蛋白的生物学功能。用杂交瘤技术制备了５８０株针对终末分化期红细胞，包括人胚肝中、晚幼红细胞和氯高铁血红素（ｈｅｍｉｎ）诱导分化的人红白血病（Ｋ５６２）细胞核蛋白的单克隆抗体。根据单抗以及核蛋白与ＨＳ２ＤＮＡ序列结合形成单抗－蛋白－ＨＳ２复合物的电泳迁移超滞留实验（ｓｕｐｅｒｓｈｉｆｔｅｘｐｅｒｉ－ｍｅｎｔ），从上述单抗中筛选出４种针对ＨＳ２结合蛋白的单抗，并用它们分别与ｈｅｍｉｎ诱导前、后的Ｋ５６２细胞核蛋白、ＨＳ２作同样的超滞留实验。发现这４种单抗对应的蛋白组分在分化前后的细胞中存在差异，利用差异筛选原理从诱导的ＨＳ２－蛋白复合物中筛选出特异于两种分化相关蛋白的单抗ａ和ｂ。Ｗｅｓｔ－ｅｒｎ印迹分析进一步证明，与单抗ａ和ｂ对应的ＨＳ２结合蛋白为红细胞分化相关蛋白，其分子量分别为７５ｋＤ和２２ｋＤ。