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基于BAC同源重组高效构建小鼠胚胎干细胞Nanog基因报告体系

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摘要 Nanog是最新发现的一个在胚胎干细胞(ES细胞)中特异表达,并在保持ES细胞多能性的机制中有重要作用的转录因子.Nanog基因的表达能非常灵敏地随ES细胞的分化而下调,使之成为指示ES细胞多能性最理想的标志基因之一.本研究基于细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)同源重组技术,并改进了将报告基因敲入目的位点的重组方案,高效构建了小鼠ES细胞(mES细胞)的Nanog/EGFP报告体系.基因打靶后的mES细胞具有与其源mES细胞相同的特性,并能稳定地将Nanog与EGFP(enhanced green fluorescence protein)的表达偶联.此报告体系能通过EGFP的表达有效报告Nanog基因的表达水平,从而对mES细胞分化或未分化状态作出明显指示.本研究为mES细胞自我更新和分化的研究提供了一个理想的实验体系,不仅能用于进一步优化mES细胞的培养体系,对研究Nanog的表达调控及其与其他维持mES细胞多能性的因子和途径之间的关系也有深远的意义.
作者 范彦 童攒 尤洁芳 杜立颖 邹方东 丁明孝 邓宏魁
机构地区 生物资源与生态环境教育部重点实验室四川大学生命科学学院 细胞增殖分化调控系统研究教育部重点实验室北京大学生命科学学院 北京实验动物中心
出处 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第15期1763-1770,共8页 Chinese Science Bulletin
基金 国家自然科学基金(批准号:30421004)资助项目
关键词 小鼠胚胎干细胞 自我更新 NANOG EGFP 细菌人工染色体 同源重组
分类号 Q78 [生物学—分子生物学]
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参考文献3

二级参考文献114

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共引文献21

科学通报
2007年 第15期

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