H5N1亚型AIV NS1基因在大肠杆菌中的表达

根据已测得的H5N1亚型禽流感病毒的NS基因序列,设计并合成一对特异性引物NS1U/NS1L,利用RT-PCR方法扩增出该毒株的NS1基因。将酶切处理后的基因片段定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)上,通过酶切分析及序列测定,鉴定出了NS1基因片段的阳性重组子。转化BL21大肠杆菌感受态细胞后,经IPTG诱导和SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,成功表达出大小约45.0kD的NS1融合蛋白,表达产物主要存在于包涵体中。用West-ern-Blotting证实重组融合蛋白可以特异性地被标准阳性血清所识别。