腺病毒5型knob蛋白的原核表达、纯化及其单克隆抗体的制备

目的:表达、纯化腺病毒5型knob蛋白,并制备其单克隆抗体(mAb)。方法:克隆并表达腺病毒的knob蛋白,其氨基端带有6-His标签。纯化后的蛋白免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性mAb。结果:成功表达了knob蛋白。SDS-PAGE显示所表达蛋白的相对分子质量(Mr)约为23000。获得了2株分泌针对knob的杂交瘤细胞系(8D7和6D4),其分泌的mAb的Ig亚类(型)均为IgG2b。ELISA检测,对应腹水mAb的效价分别为1:2.1×105,1:2.2×105。Western blot结果显示抗knobmAb具有良好的特异性。结论:成功地制备了knob蛋白及其mAb。