抗人RKIP单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备抗人RKIP(hRKIP)的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定。方法:自行构建表达人RKIP重组蛋白(reRKIP),纯化的reRKIP免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合。采用有限稀释法和间接ELISA法克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株,用免疫荧光和Western blot鉴定mAb的特异性。结果:成功构建RKIP原核表达载体,转化BL21后可高效表达reRKIP,成功地获得4株(EC1,ED2,ED5和8B3)分泌抗人reRKIP mAb的杂交瘤细胞株,杂交瘤细胞培养上清分泌的mAb在免疫荧光和Westernblot试验中均可与细胞中RKIP蛋白反应。结论:成功地制备了4株抗hRKIP mAb,为进一步研究RKIP生物学功能奠定了基础。