摘要
研究了山药基因组DNA的提取方法;对Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度和Taq酶用量进行了优化,建立了最佳的RAPD反应体系:在25μL反应体系中Mg2+浓度为2.0 mmol.L-1,dNTPs浓度为0.25 mmol.L-1,引物浓度为20 pmol.L-1,Taq酶1.5 U,模板DNA为200 ng.扩增程序为:95℃预变性7 min;94℃变性30 s,36℃退火45 s,72℃延伸2 min,共35个循环;72℃终延伸10 min.
This article studied the method of genomic DNA isolation of Dioscorea opposita Thunb. and the optimization of Mg^2+ , dNTPs, primer and Taq DNA polymerase concentration. An optimal PCR system for RAPD analysis was selected as follows: 2.0 mM Mg^2+ , 0.25 mM dNTPs, 0.2 μM primer, 1.5 U Taq DNA polymerase and 200 ng template DNA in 25 μ1 reaction volume. The PCR program for RAPD analysis was determined: preheat denatured at 95 ℃ for 7 mini denatured at 94℃ for 30 s, primer annealing at 36 ℃ for 45 s, extension at 72 ℃ for 2 min, 35 cycles in total; at last extension 72 ℃ for 10 min.
出处
《河南师范大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第1期140-143,共4页
Journal of Henan Normal University(Natural Science Edition)
基金
国家自然科学基金(30670208)
河南省重点科技攻关(0623030700)
关键词
山药
DNA
RAPD
优化
Dioscorea opposita Thunb.
DNA
RAPD
Optimization