多聚组氨酸标签的Attacin抗菌肽基因克隆及其在CHO细胞中稳定表达

目的克隆家蝇幼虫抗菌肽Attacin-His_6融合基因,构建真核表达载体并转染CHO细胞表达,为深入研究其生物学活性创造条件。方法以pUCm-T/Attacin载体为模板,用含6×His标签序列的下游引物克隆Attacin-His_6融合基因,并将其构建于pcDNA3.1(+)中,pcDNA3.1/Attacin-His_6重组质粒转染CHO细胞,ZeocinG418筛选阳性细胞株,RT-PCR检测重组质粒在CHO细胞的转录情况。结果成功扩增出Attacin-His_6融合基因,构建了pcDNA3.1/Attacin-His_6重组质粒并转染入CHO细胞中,RT-PCR从阳性克隆的CHO细胞中扩增出预期大小的目的片段,从转录水平证实CHO-Attacin-His_6重组细胞株表达了Attacin-His_6基因。结论抗菌肽Attacin基因哺乳动物型工程细胞表达系统的建立,为进一步制备其肽类抗生素奠定了基础。