结核杆菌诱导小鼠巨噬细胞凋亡过程中细胞因子的动态变化

目的:探讨结核杆菌诱导小鼠巨噬细胞凋亡过程中细胞因子的动态变化。方法:分离收集小鼠肺泡灌洗液中巨噬细胞,调整细胞浓度为5×106CFU/mL;配制结核杆菌菌悬液,菌量为5×108CFU/mL。将结核分枝杆菌H37Rv菌株菌悬液和小鼠巨噬细胞按1∶1混合,分别作用10、30、60、90、120、180min,4℃1500r/min离心10min,PBS液洗涤细胞1次。加入含15%小牛血清RPMI 1640培养液,置37℃,5%CO2孵箱中培养4h。取出培养瓶用刮匙轻轻将贴壁细胞刮下,1200r/min离心10min,分别用70%乙醇、2%戊二醛和4%甲醛固定,用流式细胞仪检测Toll样受体2(TLR2)和Bcl-2表达水平。用未加结核杆菌悬液的小鼠巨噬细胞作对照组,实验重复3次。结果:凋亡组各时间段内TLR2水平无显著变化,但凋亡组各时段TLR2表达与对照组差异均有统计学意义(P<0.01);凋亡组巨噬细胞内Bcl-2基因的表达水平10～90min无显著变化,120min后逐渐升高,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:结核杆菌H37Rv株在感染的早期对宿主巨噬细胞有较强的致凋亡作用。