约氏疟原虫红内期18S UrRNA和Pir基因扩增实验条件的研究

目的扩增红内期约氏疟原虫相关基因方法的建立和优化。方法收集约氏疟原虫感染昆明株小鼠抗凝全血,不处理或分别用淋巴细胞分离液去除白细胞、分离后破碎红细胞,提取总RNA,分别用Olig(dT)15和随机引物进行常规反转录,在不同的MgCl2浓度条件下,PCR扩增约氏疟原虫18S UrRNA和Pir基因。结果经过淋巴细胞分离液分离处理组提取的RNA的纯度相对较高,可达1.9以上,但是3种处理方式在MgCl2浓度大于等于2mmol/L条件下,可成功扩增出约氏疟原虫的Pir基因,但是只有随机引物进行反转录组才能成功扩增出18SUrRNA。结论不处理疟原虫感染全血提取的RNA纯度较低,但是能在2mmol/LMgCl2条件下成功扩增疟原虫相关基因;18SUrRNA只能从随机引物进行反转录组中成功扩增。