肝细胞的体外培养及乙醛对肝细胞的形态影响

目的通过将肝实质细胞分离、纯化、体外培养,全面分析原代肝细胞的生长状态,研究乙醛诱发大鼠肝细胞毒性和胞内游离Ca2+变化及Ca2+螯合剂的干预效应,探讨乙醛致肝细胞损伤机制及Ca2+螯合剂的保护作用。方法分离培养大鼠原代肝细胞,以含300mmol/L乙醛的培养基培养肝细胞24、48h,相差倒置显微镜下观察肝细胞的形态变化。结果相差倒置显微镜下,新分离的大鼠肝细胞折光性强,有立体感,乙醛处理肝细胞24h后肝细胞体积肿胀,颜色变深,颗粒粗糙,部分细胞脱壁,少量细胞出现细胞壁缺失,呈放星状;乙醛处理48h后,可见到肝细胞质变稀疏,细胞核固缩,表面出现胞膜疱,细胞膜破碎;相当一部分细胞破碎脱落可见到一些核已消失的肝细胞浆或残屑。结论①乙醇可导致严重的肝细胞极性紊乱,导致细胞损伤,形成不同程度的病理状态,从而在细胞及分子水平对导致肝病形成的机理进行了探讨;②乙醛诱发肝细胞毒性和损伤可能与肝细胞[Ca2+]i升高有关。