γ-干扰素对喉癌细胞血管内皮生长因子-C表达的影响

Effect of interferon-gamma on the expression of vascular endothelial growth factor C on Hep-2 laryngeal carcinoma cell lines

目的:研究γ-干扰素(IFN-γ)对人喉癌细胞株Hep-2细胞血管内皮生长因子-C(VEGF-C)基因及蛋白表达的影响。方法:将IFN-γ以不同浓度(103、104、105、106、107U/L)、不同作用时间(0、12、24、36、48、60、72 h)作用于Hep-2细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖;用实时荧光定量PCR(Realti me-PCR)法测定IFN-γ(106U/L)不同作用时间(0、2、6、12、24、36、48、60、72 h)细胞VEGF mRNA含量;用双抗体夹心酶联免疫吸附试验、Western blot法和免疫细胞化学方法测定与Realti me-PCR相同药物浓度和作用时间细胞培养上清液和细胞质中VEGF-C蛋白含量。结果:①细胞生长受到抑制,以高浓度组表现最为明显;②不同浓度(103、104、105、106、107U/L)IFN-γ作用不同时间(0、12、24、36、48、60、72 h)后,从48 h开始,105、106、107U/L的IFN-γ对Hep-2细胞有明显的抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05),但不随着浓度的增加而成正比;③106U/L IFN-γ作用后,在36 h后与对照组比,VEGF-C mRNA表达下调,差异有统计学意义(P<0.05),特别是48 h(P<0.01);④106U/LIFN-γ作用36 h后,Western blot显示细胞中VEGF-C蛋白含量显著下降;⑤106U/L IFN-γ作用48 h后,与对照组相比,Hep-2细胞质中的棕色颗粒明显减少。结论:IFN-γ可以在核酸和蛋白质水平下调Hep-2细胞分泌VEGF-C。

Objective：To observe the effect of interferon-gamma on the expression of vascular endothelial growth factor C on Hep-2 laryngeal carcinoma cell lines.Method：Hep-2 cell was exposed to interferon-gamma at a concentration（10^3、10^4、10^5、10^6、10^7 U/L） for 0、12、24、36、48、60、72 h hours.MTT colorimetric assay was used to eva1uate the effect of interferongamma on Hep-2 cell proliferation after incubation with interferon-gamma.Hep-2 cell was harvested to be detected VEGF-C mRNA levels by realtime polymerase chain reaction（Realtime-PCR） with interferon-gamma（10^6 U/L） for 0、2、6、12、24、36、48、60、72 h hours.The VEGF-C protein level in supernatants was determined by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA） and in cytoplasma by immunocytochemical staining and Western blot analysis with the same drug treatment as Realtime-PCR.Result：Hep-2 cell was significantly inhibited by IFN-γ at high concentration.Expression of VEGF-C mRNA and protein levels of Hep-2 cell at 10^6 U/L concentrations of interferon-gamma were lower than that of normal control（P〈0.05） at 48 h.Conclusion：IFN-γ can inhibit the expression of VEGF-C in Hep-2 cel1 with the level of mRNA and protein.