利用改进的基因组步行技术克隆新型水解酶全基因

利用同源-简并的混合寡核苷酸引物（consensus-degeneratehybrid oligonucleotide primers，CODEHOP）介导新微粒酶的PCR筛选，得到这些酶所有的基因片段，并用改进的基因组步行技术得到所鉴定基因的全序列。本研究基于盒式一连接改进了基因组步行方法，主要在于可用任意的限制性内切酶消化基因组DNA，用Taq DNA聚合酶对消化的DNA进行末端平滑化，并加上一个腺嘌呤（A）避免自身环化，随后腺嘌呤3’端连接于同样未磷酸化的寡核苷酸盒完成TA连接。