酵母整合型载体的构建及其功能分析

选取酿酒酵母基因组rDNA序列中25S和5S rDNA之间的一段约2.2 kb序列作为整合栽体同源重组到酿酒酵母基因组中的靶位点,PCR扩增得到该段序列左右2段大小分别为865 bp和1 350 bp的片段,将其与URA3、磷酸丙糖异构酶启动子和终止子序列依次克隆入pUC18中,构建成整合型栽体pNK。以绿色荧光蛋白基因为报告基因,荧光显微镜下观察到酿酒酵母菌株INVSc1转化子发出较强荧光,Southem杂交产生目的条带,这些结果表明载体pNK具有整合并表达外源基因功能。通过对转化子连续培养证明构建的整合型栽体的稳定性较高。