人肝癌裸鼠原位移植转移模型基因突变和表达

近几年来我所已建立了人肝癌裸鼠原位移植转移模型,并获得了稳定的高转移肿瘤系 LCI-D20及低转移肿瘤系 LCI-D35。本工作比较研究了 LCI-D20和 LCI-D35二个肝癌系中 c-fos、c-jun,N-ras、H-ras,CD44,nm23-H1的基因表达以及 p53基因第七外显子249位点突变,以期深入探求 LCI-D20株高转移的原因。材料和方法一、LCI-D20,LCI-D35肝癌取材和 mRNA 提取分别取生长35天的 LCI-D20及 LCI-D35模型中新鲜肝癌组织各100mg,采用异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法提取 mRNA,提取物分别溶于50μl DEPC 水中。二、RT-PCR 半定量分析取 mRNA 提取物10μl 70℃变性10分钟,以 oligo-dT 为引物,42℃逆转录1小时,反应后95℃变性10分钟。应用 PCR 扩增六种基因的 cDNA 产物。